??利用抗体芯片发现饮食肥胖导致的血液循环炎症因子改变小鼠细胞因子抗体芯片AAM-CYT-G3
杂志名称:
Diabetes,ObesityandMetabolism
文献题目:
FentonJI,NunezNP,YakarS,etal.Diet‐inducedadiposityalterstheserumprofileofinflammationinC57BL/6Nmiceasmeasuredbyantibodyarray[J].Diabetes,ObesityandMetabolism,,11(4):-.
本实验所用产品:
小鼠细胞因子抗体芯片AAM-CYT-G3(62个炎症、生长、血管生成等细胞因子抗体芯片)
实验样品:
血清
研究背景:
随着生活水平的提高,肥胖症的发病率在过去的20年中大幅度上升。同时肥胖症也提高了很多其他疾病的风险。长久以来,脂肪组织被认为是以脂肪来储存能量的静态的结构。但最新的研究揭示,脂肪组织是一个内分泌器官,可以产生多种被统称为脂肪因子的蛋白,荷尔蒙和细胞因子。这些脂肪因子控制很多的生物活动,包括一些与病理相关的疾病。脂肪细胞的很多分泌产物,包括TNF-α,IL-6,C反应蛋白(CRP)都与免疫反应相关。尤其是IL-6,参与了众多的免疫通路调节。研究发现,随着内脏部位脂肪的增加,一些促炎性脂肪因子,比如IL-6,leptin,TNF-α会被分泌出来,而抗炎性的脂肪因子,例如adiponectin则会减少分泌。这些研究使得内脏部位的脂肪组织被认为是系统性炎症的关键调控因子。而体重减轻之后下降的炎症因子也进一步证实了这一说法。脂肪组织分泌的其他因子也被认为与这一免疫反应有关,但现在还没有研究能够弄清楚肥胖症是否与I型或II型免疫/炎症状态相关。因此课题用小鼠模型对此展开研究。
研究思路
IDEAS
1、实验动物及分组
36只6周大,平均体重为16.5g的雌性C57BL/6N小鼠被分为三组,一组是正常饮食(对照组,19.2%蛋白质,67.3%碳水化合物,4.3%脂肪),一组是卡路里限制饮食(限食组,卡路里是对照组的70%,但维生素,微量元素和脂肪酸的供给量维持正常),一组是高脂肥胖饮食(DIO组,26%蛋白质,26%碳水化合物,35%脂肪)
2、抗体芯片检测
在采用对应的饮食喂养了10周后,对每个组中的16周大的小鼠,采取将3只小鼠的血清混合后作为一个单独的样品的做法,即每组12个小鼠作为4个样品进行抗体芯片的检测。这一做法是由于小鼠的血清还需用于其它实验,单只小鼠剩余的血清量不足以用于芯片的检测。因此,每个小鼠贡献33.3ul的血清,组成ul的混合血清。
血清在经过了10倍稀释后,采用RayBiotech小鼠AAM-CYT-3膜芯片进行检测。在经过化学发光反应并压片后,采用QuantityOnesoftware软件进行分析。
此外,还采用ELISA方法,对Adiponectin和IGF-1进行了验证。
结果
Results
通过对芯片的数据进行分析,研究人员发现在DIO组的小鼠中,IGF-1和leptin升高,而leptin受体和adiponectin降低,同时IGFBP-3,-5,-6也与对照组的不同。而在限食组中,IGFBP-3,-5,-6,adiponectin升高,而IGF-1和leptin降低。
总的来说,在DIO组小鼠中,与免疫相关的细胞因子大部分都降低了,除了IL-6出现了升高。
结论:
研究人员认为,抗体芯片作为一个高通量的检测工具,使得他们可以同时监测多种免疫调节蛋白的水平并分析它们之间的关系,并进一步揭示肥胖症相关疾病的风险。研究人员发现,在肥胖的小鼠中,代表II型免疫反应的IL-4,IL-5和IL-13的水平发生了下降,而代表I型免疫反应的IFN-γ的水平则没有发生改变,同时IL-6在肥胖小鼠中也升高,提示在肥胖的小鼠中主要是发生了I型免疫反应导致的慢性炎症。
RayBiotech作为国际领先的蛋白芯片和免疫产品专业供应商,拥有世界上种类最多的抗体芯片及ELISA及产品,其产品检测灵敏度高,种属多样,包括涵盖人、小鼠、大鼠、猪、马、牛、猴、犬、猫、兔等多个种属。使用RayBio公司产品发表的文献达到数千篇。
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